使用奧林巴斯進口顯微鏡 CKX53 觀察組織切片一般有以下步驟:
前期準(zhǔn)備
熟悉顯微鏡操作:了解 CKX53 顯微鏡的各個部件及其功能,如光源調(diào)節(jié)旋鈕、粗細準(zhǔn)焦螺旋、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺調(diào)節(jié)旋鈕等。
檢查顯微鏡:確保顯微鏡的光源工作正常,亮度可調(diào)節(jié)。檢查物鏡和目鏡是否干凈,如有灰塵或污漬,需用專用的擦鏡紙輕輕擦拭干凈。
準(zhǔn)備切片:從切片盒中取出需要觀察的組織切片,檢查切片是否完整、無破損,切片上的組織是否有脫落等情況。確保切片已經(jīng)過合適的染色處理,如常用的 HE 染色,以便于觀察細胞和組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
顯微鏡操作與觀察
放置切片:打開顯微鏡載物臺的壓片夾,將組織切片平穩(wěn)地放置在載物臺上,使切片上的組織部位正對著通光孔中心,然后輕輕合上壓片夾,固定切片。
低倍鏡觀察
調(diào)節(jié)光源:打開光源開關(guān),通過調(diào)節(jié)亮度旋鈕,使光線強度適中。一般來說,開始觀察時,光線不宜過強,以免影響對組織形態(tài)的整體判斷。
粗調(diào)焦距:轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋,使載物臺上升,同時從側(cè)面觀察物鏡與切片的距離,直到物鏡接近切片,但不要接觸到切片,避免壓碎切片或損壞物鏡。然后通過目鏡觀察,反向轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋,使載物臺緩慢下降,直到能看到組織切片的大致圖像。
微調(diào)焦距:使用細準(zhǔn)焦螺旋進行微調(diào),使圖像更加清晰。在低倍鏡下對整個組織切片進行全面觀察,了解組織的整體結(jié)構(gòu)、形狀、大小,以及病變組織在整個切片中的大致位置和范圍,確定需要進一步觀察的區(qū)域。
中倍鏡觀察
轉(zhuǎn)換物鏡:在低倍鏡下找到感興趣的區(qū)域后,將其移至視野中央,然后輕輕轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器,將低倍物鏡轉(zhuǎn)換為中倍物鏡,通常為 20 倍物鏡。
重新調(diào)焦:轉(zhuǎn)換物鏡后,由于不同物鏡的焦距略有差異,可能需要再次微調(diào)細準(zhǔn)焦螺旋,使圖像清晰。在中倍鏡下可以更清楚地觀察組織的層次結(jié)構(gòu)、細胞的排列方式、組織與組織之間的關(guān)系等,進一步確定病變的具體部位和特征。
高倍鏡觀察
再次轉(zhuǎn)換物鏡:將中倍鏡下觀察到的重點區(qū)域移至視野中央,轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器,換用高倍物鏡,一般為 40 倍或更高倍數(shù)的物鏡。
精細調(diào)焦:高倍鏡下視野變小,圖像放大倍數(shù)更高,此時只需輕微轉(zhuǎn)動細準(zhǔn)焦螺旋,就能使圖像達到最佳清晰狀態(tài)。在高倍鏡下仔細觀察細胞的形態(tài)、大小、細胞核的形態(tài)、染色質(zhì)的分布、細胞質(zhì)的顏色和質(zhì)地等細節(jié),分析細胞是否存在異常變化,如細胞形態(tài)的改變、細胞核的增大或縮小、核仁的明顯程度等,判斷組織是否存在病變以及病變的類型和程度。
觀察記錄與結(jié)束工作
記錄觀察結(jié)果:可以使用顯微鏡自帶的圖像采集系統(tǒng)對典型的觀察圖像進行拍攝保存,也可以通過手繪的方式,繪制出觀察到的組織細胞形態(tài)和病變特征,并標(biāo)注出關(guān)鍵結(jié)構(gòu)和病變部位。同時,在實驗記錄本上記錄下觀察到的主要現(xiàn)象、病變特征、切片編號等信息,以便后續(xù)的分析和總結(jié)。
整理顯微鏡:觀察結(jié)束后,關(guān)閉顯微鏡光源開關(guān),將物鏡轉(zhuǎn)回到低倍鏡位置,松開壓片夾,取下切片,將切片放回切片盒中妥善保存。用擦鏡紙將物鏡和目鏡擦拭干凈,如有必要,可使用少量的二甲苯等有機溶劑擦拭沾有油漬或污漬的鏡頭,但要注意擦拭后及時用干凈的擦鏡紙擦干,防止溶劑殘留損壞鏡頭。
清理臺面:清理顯微鏡載物臺和周圍的雜物,保持實驗臺面整潔干凈。
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